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【柏恒科技小課堂】qPCR反應(yīng)漫談（續(xù)）發(fā)布時間：2026-01-04

在上一期的qPCR反應(yīng)漫談中，從一開始沃森和克里克兩位基因?qū)W奠基人的兩個論點(diǎn)簡單延伸至染料法和探針法兩類常見的qPCR反應(yīng)。這一期做一個從PCR反應(yīng)過程出發(fā)到一些實(shí)驗(yàn)問題優(yōu)化的分享。01(先拋磚）PCR反應(yīng)原理：PCR通過變性、退火和延伸三個步驟的循環(huán)往復(fù)，模擬DNA在體外擴(kuò)增的...

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2022
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程序降溫盒使用經(jīng)驗(yàn)分析
程序降溫盒的使用方法直都搞不明白，覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細(xì)胞剛開始還沒凍的時候就是室溫)，然后把細(xì)胞放進(jìn)去，再一起移到-80度，這樣才能實(shí)現(xiàn)程序降溫呢?時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用...
2022
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三槽梯度PCR儀你真的了解嗎?
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這...
2022
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程序降溫盒使用小技巧
程序降溫盒在沒有酒精或任何液體的情況下,能確保在低溫冰箱中樣品的降溫速率為-1℃/分鐘。它們可以運(yùn)用于各種細(xì)胞類型，包括干細(xì)胞，原代細(xì)胞和細(xì)胞系。這對于大多數(shù)需要培養(yǎng)的細(xì)胞系來說是非常理想的。已經(jīng)通過干細(xì)胞，原代細(xì)胞和細(xì)胞系的使用，證明了提...
2022
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迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法
迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項(xiàng)可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度，通過每列之間≥2°C的間隔溫度升降，使得可同時對于一系列的溫度進(jìn)行測試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計(jì)帶有三個或更...
2022
3-1

三槽梯度PCR儀科普知識大全，你真不一定都懂
三槽梯度PCR儀溫度的準(zhǔn)確性可能會對PCR的成敗與否起決定性作用，因?yàn)镻CR的三個主要步驟都依賴于溫度。類似地，加熱模塊上孔與孔之間的溫度一致性對于獲取可靠而可重復(fù)的PCR結(jié)果也是至關(guān)重要的。因此，所使用的PCR儀能在模塊之間準(zhǔn)確到達(dá)設(shè)定的...
2022
1-21

雙槽梯度PCR儀應(yīng)該這樣使用
雙槽梯度PCR儀的反應(yīng)原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火（復(fù)性）--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后，使模板DN...

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